国自然标书技术路线 种绘制逻辑

　　以解决 10-20 个小科学问题为目的的分类方法。优点是把 3-4 个「拟解决的关键科学问题」，解构成 10-20 个小科学问题来逐一解决■★★。但相互之间又形成功能单元模块◆◆◆，共同指向并组成同一个「关键的科学问题」。

　　优点：能让专家清楚地知道整个研究计划的时间线，评估是否有能力按照规定时间完成实验内容■■★◆◆。

　　9. 细胞功能探索：细胞增殖、细胞周期检测◆■■■■★、细胞衰老◆★★、细胞干性、细胞分化★◆◆★◆★、细胞凋亡、细胞焦亡、炎症风暴、迁移■★★、侵袭能力◆★★■◆◆，表面受体表达等等；亚细胞结构的囊泡和细胞器的分离和电镜影像学观察★★◆★；

　　参与多项国自然面上◆■◆★■、青年、地区以及省自然项目标书的撰写，目前国自然成功数量 17 个。有丰富的医学知识背景（有医师资格证）以及科研实验经历，熟悉多项疾病的发病机制，擅长将科研思路与临床问题相结合。

　　国自然级别的技术路线图■◆■，要根据研究方案的 3-4 个模块◆★■★，分成 3-4 张子图■■，一一对应★★★◆◆。而每张技术路线图的画法，也有不同类型的区别◆■★◆，主要分为以下四种（其中，第三种更加推荐）：

　　6. 检测 RNA 分子在组织和细胞空间分布和表达丰度的技术：活细胞动态 RNA 成像技术、单分子 RNA FISH 原位杂交◆★★■◆◆、多分子 RNA Scope 原位杂交技术、细胞核-细胞质分离结合 qPCR◆★、单细胞测序技术■★■、空间转录组技术、Northern blot、dot blot 等等；

　　5. 检测 DNA 拷贝数★★■★、突变与否的技术：FISH 原位杂交、qPCR、基因组测序等等；

　　分子筛层析法■◆◆★★■、western blot 技术、双向 2D 电泳◆■、质谱分析等等★■■◆★★；

　　7. 分子表达干预技术：分子克隆操纵表达技术★◆◆■、病毒载体过表达或者敲减表达（shRNA★■★◆■■、siRNA）、点突变技术、CRISPR 敲除或者敲入技术、CRISPRi 沉默技术、功能区分段（truncate）敲除技术、靶蛋白小分子抑制剂或者单抗抑制剂等等◆◆◆；

　　10■★★◆. 分子间互作实验方法■★★：RNA、DNA、蛋白之间的互作分析技术如下图；

　　4. 检测某蛋白分子的高级结构信息：蛋白结晶后冷冻电镜解析高级结构、分子对接分析等等；

　　以实验方法为主线的合理之处在于每种技术所实现的实验目的不同，而且理解了每种技术的原理特点，你会发现实验方法的组合和选择很容易达到。

　　8. 体内水平探索分子功能◆★■■■：类器官、PDX 模型、裸鼠皮下成瘤、各种 XXX 疾病动物模型、基因编辑动物■■★◆、活体成像技术等；

　　免疫荧光■◆■★◆◆、免疫组化■◆★◆★■、细胞核-细胞质分离结合 WB、GFP 标签融合蛋白示踪技术、空间蛋白质组学等等；

　　2. 检测某蛋白分子总的表达量（不含空间信息）：ELISA 技术（定量）◆★■★、western blot 技术（半定量■★◆■★，不准确）；